核酸电泳技术的分类和应用

核酸电泳技术是生物化学中最为广泛的一种技术,是指使用电流来操纵蛋白质分子以用于一系列生物医学研究、诊断和制造目的实验的过程。目前核酸电泳技术分为以下4种:凝胶电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、等电聚焦电泳、毛细管电泳。

一、凝胶电泳

凝胶电泳是最常用的一种蛋白表达分析技术。

技术原理是根据检体中蛋白质分子量大小的不同,使其在电泳胶中分离。在大肠杆菌表达纯化外源蛋白的实验中,SDS-PAGE更是必不可少的操作。

技术应用是检测蛋白的表达情况(表达量,表达分布),以及分析目的蛋白的纯度等。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)用于分离蛋白质较小分子核酸。琼脂糖凝胶电泳适用于分离同工酶及其亚型、大分子核酸等。

二、醋酸纤维素薄膜电泳

醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。

技术原理以醋酸纤维薄膜为支持物,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。这种薄膜对蛋白质吸附小,能消除电泳中出现的“托尾”现象,具有分离速度快、样品用量小的特点,适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。

技术应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、类固醇激素及同工酶等的分离分析中,尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低,但它具有简单、快速等优点。

三、等电聚焦电泳

等电聚焦电泳是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展。

技术原理是在稳定的pH梯度中按等电点的不同来分离两性大分子。

技术应用于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分,在区带电泳中分辨率最好。常用的pH梯度支持介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等。

四、毛细管电泳

毛细管电泳又称高效毛细管电泳。

技术原理是以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的将液相分离,是一种利用电泳和电渗流的电动力学原理,在一种空芯的微小内径的毛细管中进行混合物的高效分离技术。

毛细管电泳分类为:毛细管自由溶液区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电聚焦电泳及胶束毛细管电动力学色谱。

发表评论